以下是微生物限度检查仪的标准操作流程及关键注意事项，整合最新操作规范（2025年）整理：

‌一、操作前准备‌

‌环境消毒‌

超净台紫外线照射30分钟，操作台面用75%乙醇擦拭。

操作人员穿戴无菌服、口罩及灭菌手套。

‌仪器与耗材‌

检查真空泵压力（30–60kPa）及管路密封性；

预灭菌滤膜（0.45μm）用无菌镊子置于滤杯内，避免手部接触；

固体培养基提前融化并冷却至45℃备用。

‌二、标准化操作步骤‌

‌步骤‌ ‌操作要点‌ ‌风险控制‌

‌1. 样品处理‌ - 液体样品（纯化水）：直接取样100ml

- 固体样品（药粉）：1:10稀释于无菌生理盐水35 含抑菌成分样品需用硫乙醇酸盐中和剂冲洗

‌2. 安装滤器‌ 滤杯唇形密封圈对齐基座，旋紧固定环防漏气48 安装后试抽滤100ml纯化水验证密封性

‌3. 过滤富集‌ 负压抽滤样品（3–5min/100ml），含颗粒物样品需预过滤防堵塞28 过滤速度＜1ml/min时更换滤膜

‌4. 滤膜转移‌ 无菌镊夹取滤膜，‌菌面朝上‌贴于平板计数培养基，排除气泡 转移全程≤15秒，避免空气污染

‌5. 培养与计数‌ - 细菌：30–35℃培养48–72小时

- 霉菌/酵母菌：23–28℃培养5–7天810 培养皿倒置放置防冷凝水滴落

‌特殊样品处理‌：

‌抗生素类‌：增加冲洗体积至500ml（如头孢菌素）；

‌高油脂样品‌：正己烷溶解后，用含吐温80的缓冲液冲洗。

‌三、关键注意事项‌

‌无菌控制‌

滤膜拆封后立即使用，镊子每批次火焰灭菌；

超净台风速≥0.45m/s，定期沉降菌监测。

‌仪器维护‌

滤杯使用后121℃高压灭菌30分钟；

每月用3%过氧化氢循环冲洗管路20分钟；

真空泵每季度更换专用润滑油。

‌方法验证‌

新样品需做‌回收率试验‌（加标回收率70–130%为合格）；

滤膜完整性测试：过滤后注入100ml空气，压力下降≤5kPa