以下是2025年版《中国药典》纯化水微生物检验的核心方法、操作流程及标准要求：

 一、检验核心方法：‌薄膜过滤法‌

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原理与步骤‌

取规定体积纯化水（通常≥1ml）通过孔径0.45μm的微孔滤膜，微生物被截留在膜表面。

滤膜转移至培养基：需氧菌用‌胰酪大豆胨琼脂（TSA）‌，霉菌/酵母菌用‌沙氏葡萄糖琼脂（SDA）‌。

培养条件：

TSA：30-35℃培养3-5天（需氧菌总数计数）。

SDA：20-25℃培养5-7天（霉菌/酵母菌计数）。

‌结果计算‌：统计菌落形成单位（CFU），需氧菌总数≤100 CFU/ml，霉菌/酵母菌总数≤100 CFU/ml。

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关键细节‌

‌样品时效性‌：取样后需在2小时内完成检测，避免微生物繁殖干扰结果。

‌滤膜处理‌：过滤后用无菌缓冲液（如pH 7.0氯化钠蛋白胨缓冲液）冲洗滤膜，去除抑菌成分残留。

‌阴性对照‌：同步进行缓冲液过滤的空白对照实验，确保无污染

三、操作注意事项

‌环境要求‌

操作需在局部洁净度100级环境下进行（如超净工作台）。

实验器具需121℃湿热灭菌，滤头支持火焰快速灭菌。

‌方法验证‌

首次检验需进行‌方法适用性试验‌，验证微生物回收率≥70%。

强抑菌性样品需中和处理（如加聚山梨酯-80）。

‌误差规避‌

避免滤膜过度湿润导致菌落融合，影响计数准确性。

定期校准流量传感器，确保抽滤速率≥600ml/min（满载）